BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(增強(qiáng)型)

　　產(chǎn)品描述

　　BCA Protein Assay Kit是一種即用型的Western blot相關(guān)總蛋白分析試劑，可通過(guò)測(cè)量562nm處的吸光度并與蛋白標(biāo)準(zhǔn)物的吸光度-濃度曲線進(jìn)行比較，快速測(cè)定總蛋白濃度。蛋白質(zhì)定量過(guò)程可以在45分鐘內(nèi)完成。

　　基于BCA (Bicin -choninic Acid) 法研制而成，實(shí)現(xiàn)了對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行快速、穩(wěn)定、靈敏的濃度測(cè)定。其原理是在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)分子中的肽鏈結(jié)構(gòu)能與Cu2+絡(luò)合生成絡(luò)合物。同時(shí)將Cu2+還原成Cu+。該測(cè)定法的紫色反應(yīng)產(chǎn)物是由兩個(gè)BCA分子與一個(gè)亞銅離子螯合形成的。 這種水溶性復(fù)合物在562nm處表現(xiàn)出很強(qiáng)的吸光度，在較寬的工作范圍 (20-2,000μg/ ml) 中， 隨著蛋白質(zhì)濃度的增加，吸光度幾乎呈線性。

　　BCA方法不是真正的端點(diǎn)方法，也就是說(shuō)最終顏色會(huì)繼續(xù)變化。但是孵育后顏色變化的速度足夠慢可以允許分析大量的樣品。據(jù)報(bào)道蛋白質(zhì)的大分子結(jié)構(gòu)，肽鍵的數(shù)量以及四種特定氨基酸 (半pga、sas和las) 的存在與BCA的顏色形成有關(guān)。對(duì)二肽、三肽和四肽的研究表明顏色形成的程度不僅僅是由單個(gè)產(chǎn)生顏色的官能團(tuán)的總和引起的。

　　因此通常參考諸如牛血清白蛋白 (BSA) 的常見(jiàn)蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)確定待測(cè)蛋白質(zhì)濃度。從蛋白質(zhì)制備一系列已知濃度的稀釋液，并與待測(cè)物一起進(jìn)行測(cè)定，然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線確定每個(gè)待測(cè)物的濃度。如果需要精確定量待測(cè)蛋白質(zhì)，建議選擇質(zhì)量與待測(cè)蛋白質(zhì)相似的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品。例如在測(cè)定免疫球蛋白樣品時(shí)，可以使用牛γ球蛋白 (BGG) 標(biāo)準(zhǔn)品。在介紹的兩種檢測(cè)法中，其中試管檢測(cè)法需要更大體積 (0.1mL) 的蛋白質(zhì)樣品，但是由于它使用的樣品與工作試劑之比為1:20 (v / v)，因此干擾物質(zhì)的影響降至低。

　　產(chǎn)品特性

　　組分500 tests2500 tests5000 tests

　　BCA Reagent A100 mL500 mL500 mL × 2

　　BCA Reagent B3 mL5 mL × 35 mL × 6

　　BSA Standards

　　2mg/mL1 mL × 41 mL × 102 mL × 10

　　使用方法

　　A.試管配制

　　1.以50:1的比例混合BCA試劑A和BCA試劑B。即將50ml BCA試劑A與1ml BCA試劑B混合。

　　注意: 使用以下公式確定所需工作試劑的總量： (標(biāo)準(zhǔn)品+待測(cè)樣品) x (重復(fù)次數(shù)) x (每個(gè)樣品所需要的BCA工作液) =所需BCA工作液總體積。

　　2.按照表1配制新的標(biāo)準(zhǔn)品體系。(用0.9% NaCl或PBS稀釋白蛋白 (BSA) 標(biāo)準(zhǔn)液)。

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